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硫是所有植物生长发育不可缺少的营养元素之一，其含量影响着土壤中各种生物化学反应以及植物的正常生长发育[1]。表层土壤中的硫大部分以有机硫的形态存在，无机硫占的比例很小，而多数有机硫必须矿化为SO42–的形态才能被作物吸收利用[2]。有机硫可以分为碳键硫、酯键硫以及未知态硫，碳键硫和酯键硫对植物是有效的，且对当季作物来说，碳键硫的有效性低于酯键硫，未知态硫对植物的有效性还不明确[3-6]。也有研究表明，土壤有机硫含量影响着土壤有效硫的有效性，植物吸收的土壤有机硫占其吸收所有土壤硫的45%[7-8]。因此有机硫是土壤中硫的重要组成部分之一，其有效性评价与土壤微生物活动和生物化学转化过程以及土壤硫元素循环均有密切相关性[9-10]。
土壤硫的矿化主要取决于土壤的化学性质和生物学特性，而物理性质对土壤硫的影响很小[11]。有机硫矿化过程会发生一系列的生物学以及生物化学反应，受土壤性质、微生物活性、微生物及作物根系分泌物质等因素的影响[12]。而酶是土壤硫矿化的催化剂，Riffaldi等[13]研究发现潜性矿化硫与硫酸盐水解酶、芳基硫酸酯酶、蛋白酶和脱氢酶的活性显著相关。国内外许多研究结果均表明，植物有效硫的来源主要是土壤有机硫。有试验表明作物的生长期越长，有效硫的地位就越重要[14]。Freney等[15]的研究表明，在土壤中施用适量硫肥的处理有机硫的矿化更为剧烈，而有机硫矿化剧烈，矿化形成的无机硫酸盐含量提高，更有利于植物的吸收。有研究表明种植作物也许会刺激土壤有机硫的矿化，种植作物后比种植作物前土壤有机硫的矿化量提高[16-17]。
长期施肥有机硫转化的研究在红壤、潮土、黑土、褐土、草甸土等土壤类型的报道较集中[18-22]，而棕壤长期定位施肥有机硫变化研究比较少，并且长期定位施肥有机硫研究方面的种植制度多为短期或连作制度，对于轮作的研究较少，但很多试验证明土壤有机硫的矿化过程与地上作物的种植有密切关系。棕壤是我国重要的土壤类型，更是辽宁省主要土壤类型，目前对于长期施肥条件下，采用玉米–玉米–大豆轮作方式棕壤有机硫矿化特征有待深入研究，外界因子如温度、pH、有机碳、酶活性等是否会对有机硫矿化产生明显驱动均不十分清楚。关于长期定位试验对土壤硫的影响研究大多是侧重于硫元素的有效性，而对土壤供硫潜力等的研究不多。国内外关于长期定位施肥的土壤研究比短期肥料试验或盆栽试验少得多，对于影响有机硫矿化的因素的研究也不够详细[23-26]。故依托沈阳农业大学于1979年建立的棕壤肥料长期定位试验，系统地研究长期 (36年) 不同处理玉米–大豆轮作体系中土壤有机硫矿化特征及其主要驱动因子。
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试验区位于沈阳农业大学棕壤肥料长期定位试验基地，试验始建于1979年，持续有36年。基地位于松辽平原南部的中心地带，属于温带湿润–半湿润季风气候，年平均降雨量为574～684 mm，平均气温7.0℃～8.1℃，无霜期为148～180天。试验从1979年开始，采用有机肥和无机肥不同处理配合及玉米–玉米–大豆轮作种植体系。土壤是发育在第四纪黄土性母质上的简育湿润淋溶土，1979年试验前土壤的基本化学性质为pH 6.5、有机碳9.18 g/kg、全氮0.80 g/kg、碱解氮105.5 mg/kg、全磷0.38 g/kg、有效磷6.5 mg/kg、全钾21.1 g/kg、速效钾97.9 mg/kg[27-28]。
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试验采用裂区设计，分为化肥、低量有机肥和高量有机肥3个区组，共15个施肥处理，小区面积为160 m 2。本研究选用其中的7个处理：1) 不施肥 (CK)；2) 低量化学氮肥 (N1)；3) 高量化学氮肥 (N2)；4) 低量化学氮+磷肥 (N1P)；5) 低量化学氮+磷钾肥 (N1PK)；6) 低量有机肥 (M1)；7) 低量有机肥+低量化学氮+磷钾肥 (M1N1PK)。具体养分投入量见表1。
表 1 玉米和大豆季有机肥和化肥投入量 (kg/hm2)
Table 1. Manure and chemical fertilizer inputs in maize and soybean season
种植季
Planting season有机肥
Manure化肥 Chemical fertilizer N (N1) N (N2) P2O5 K2O 大豆季 Soybean season 13.5 × 103 30 60 90 90 玉米季 Maize season 13.5 × 103 120 180 60 60 有机肥采用腐熟的猪厩肥 (干重，平均养分含量为有机质119.6 g/kg、N 5.6 g/kg、P2O5 8.3 g/kg、K2O 10.9 g/kg)，供试氮磷钾肥为尿素 (N 46%)、过磷酸钙 (P2O5 12%、S 1.87%) 和硫酸钾 (K2O 50%、S 8.79%)，所有肥料均作为基肥在播种前一次施入。种植制度为玉米–玉米–大豆轮作，一年一熟。1992年起，种植大豆不再施有机肥。2014年大豆品种为沈农16号，密度150000株/hm2；2015年玉米品种为东单6531，密度60000株/hm2。
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定位试验每年作物收获后，每个小区分设3个次级小区，每个次级小区面积30 m2，作为每个处理的重复。每个次级小区随机选取5点，采集不同层次土壤样本，组成混合样，风干，保存于专用定位样本室，用于各项指标分析。本研究选取2014和2015年耕层土壤 (0—20 cm) 样本进行各项指标分析，土壤常规化学指标见表2。
表 2 长期施肥条件下大豆季和玉米季土壤化学指标
Table 2. Soil chemical properties in soybean and maize seasons under long-term fertilization
种植季
Planting season处理
TreatmentpH
(soil∶water
=1∶2.5)有机碳
Organic C
(g/kg)全氮
Total N
(g/kg)大豆季
Soybean seasonCK 5.92 a 8.28 d 1.64 b N1 5.43 bc 8.64 cd 1.56 b N2 5.31 c 8.42 d 1.61 b N1P 5.42 bc 8.95 c 1.61 b N1PK 5.33 c 8.84 c 1.59 b M1 5.71 ab 10.77 a 1.78 a M1N1PK 5.74 a 10.37 b 1.83 a 玉米季
Maize
seasonCK 5.75 c 7.98 c 0.79 cd N1 5.17 d 9.11 b 0.85 bc N2 4.74 e 9.02 b 0.95 b N1P 5.24 d 7.01 d 0.71 d N1PK 5.23 d 9.45 b 0.90 bc M1 6.81 a 11.35 a 1.08 a M1N1PK 6.07 b 11.12 a 1.07 a 注（Note）：同列数据后不同字母表示处理间在 0.05 水平差异显著 Values followed by different small letters indicate significant difference among treatments of the same crop at the 0.05 level. -
pH采用水土比2.5∶1浸提，pH计 (PHS-3C型，上海雷磁) 测定；有机碳、全氮采用元素分析仪 (Vario EL III，Germany) 测定。
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矿化培养试验参照Pirela等[29]方法进行。称取风干土样30 g，石英砂30 g，将两者充分混合后置于淋滤管内，尽量保证淋滤管内的土样与石英砂均匀且松紧度一致。同一土样分别设置3次重复。为去除土壤之前矿化的硫酸盐，我们采用0.01 mol/L的CaCl2溶液浸润土壤平衡12 h后，再用0.01 mol/L的CaCl2溶液彻底的淋洗试验土壤，直至土壤再无SO42–被淋洗出来即可开始淋滤试验。为防止在添加溶液时会使淋滤管内土壤溅起，在倾倒溶液时在土壤表面覆盖一层滤纸，并且为淋滤管配置盖子以防止其中水分蒸发。将准备好的淋滤管分别放入20℃和30℃培养箱中，分别于培养第2、4、6、8、10、12、14周后，采用75 mL CaCl2溶液淋洗，淋洗出的液体定容至100 mL容量瓶中后过滤，利用电感耦合等离子体原子发射光谱仪 (ICP-AES) 测定其中硫酸盐的含量。
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土壤芳基硫酸酯酶和中性蛋白酶分别采用S-ASF和S-NPT活性检测试剂盒，处理风干土壤样本，按照试剂盒标准说明进行各项操作，最后采用酶标仪 (Epoch，Bio Tek，USA) 分别在410和680 nm处比色测定。
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根据矿化淋滤试验所得数据，通过一级动力学方程计算得出有机硫的矿化潜力、矿化速率常数以及矿化半衰期。一级动力学方程为：
${S_t} = {S_0}[1 - \exp ( - kt)]$ 式中，S0为潜在矿化势；St为一定时间土壤硫累积矿化量；k为一级动力学常数；t为培养时间 (周)；t0.5为常数，代表矿化半衰期，潜在矿化势S0被矿化50%所需的时间 (周)。参数S0和k用下述方法求得。先将上式转化为：
${S_0} - {S_t} = {S_0}\exp ( - kt)$ 等式两端同时取对数，得：
$\ln ({S_0} - {S_t}) = \ln {S_0} - kt$ 变形后的公式虽然是一直线型公式，但由于等式两端均含有欲求参数S0，所以需要先估算—S0代入公式左端后，以最小二乘法计算出公式右端的两参数S0和k；然后再将这一刚刚求出的S0代回等式左端进行第二次计算，以最小二乘法求得新的等式右端的S0和k，如此反复迭代计算，直至前后两次求出的S0相对误差小于0.0001，此时求得S0和k即为一级动力学方程式中的两参数。根据S0和k即可计算出t0.5 (t0.5 = 0.693/k)[30]。
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1) 芳基硫酸酯酶：
每天每克土样中产生1 μmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
$ \begin{split} & {\rm{S\text{-}ASF}}{\text{}}[{\rm{{\text{μ}}mol/}}({\rm{g}}\cdot {\rm{d}}),{\rm{soil}}]=\left(\Delta A+0.013\right) \div0.0033\times \\ &\quad {V}_{\text{反总}} \div W \div T=38.19\times \left(\Delta A+0.013\right) \end{split}$ 式中：T—反应时间，1 h = 1/24天；V反总—反应体系总体积，2.625 × 10–4 L；W—样本质量，0.05 g。
2) 中性蛋白酶：每天每g土样中产生1 mg酪氨酸为一个S-NPT活力单位。
$ \begin{split} & {\rm{S\text{-}NPT}}[{\rm{mg}}/\left({\rm{g}}\cdot {\rm{d}}\right),{\rm{soil}}]={C}_{\text{标准管}}\times \left({A}_{\text{测定管}}-{A}_{\text{对照管}}\right) \div\\ &\quad {A}_{\text{标准管}}\times {V}_{\text{反总}} \div W \div T=48\times \left({A}_{\text{测定管}}-{A}_{\text{对照管}}\right) \div {A}_{\text{标准管}} \end{split}$ 式中：C标准管—标准管浓度，0.05 mg/mL；V反总—反应体系总体积，0.2 mL；T—反应时间，30 min 为1/48天；W—样本质量，0.01 g。
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采用Excel 2016作图和SPSS 22.0统计软件分析数据，采用单因素方差分析和邓肯法进行显著性检验。
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由图1可以看出，20℃条件下，随着培养时间的延长，有机硫矿化量逐渐增加；前4周矿化速率较快，土壤中有机硫大量进行矿化分解，分解量占总分解量的37.26%～56.01%，此后矿化量增幅变缓。不同施肥处理对有机硫矿化量的影响各不相同，7个处理的总体变化趋势为M1N1PK > M1 > N1PK、N1、N2 > N1P > CK。与CK相比，施用氮肥后，有机硫矿化量明显增加，但随着化学氮肥施用量的增加，有机硫矿化量没有明显变化。在只施用化肥的处理中，N1、N2和N1PK有机硫矿化量没有明显差别，但N1P处理的土壤有机硫矿化量却比其它处理降低了11.27%～12.70%。M1处理有机硫矿化量明显增加，较CK处理增加了47.92%，较单施化肥处理增加了3.78%～18.87%。M1N1PK处理有机硫矿化量在所有处理中最高，比CK处理提高了57.30%，比其它处理提高了6.34%～26.41%。30℃条件下，有机硫矿化总体趋势与20℃条件下相同，但有机硫矿化量整体都高于20℃条件下，平均增加幅度在6.20%～9.62%，温度升高有利于有机硫的矿化。玉米季有机硫矿化量总体趋势与大豆季相同，但有机硫矿化量总体比大豆年份高出6.17%～9.61%，玉米种植季有机硫矿化量高于大豆种植季。
图 1 矿化培养试验不同温度和作物下各处理土壤有机硫矿化量的变化
Figure 1. Mineralization amount of soil organic sulfur in each treatment under different temperatures and crops in the laboratory culture test
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一般土壤有机硫的累计矿化量与矿化时间之间符合一级动力学模型[30-31]，用一级动力学方程对土壤有机硫累计矿化量和培养时间进行拟合，得到土壤有机硫潜在的矿化量，即土壤有机硫矿化势 (S0) 和矿化常数 (k)[17]。
由表3可以看出，不同处理有机硫矿化采用一级动力学方程拟合效果比较好 (r > 0.938)[17]。在20℃的条件下，施肥处理的土壤有机硫矿化势均高于CK。随着化学氮肥施用量的增加，有机硫矿化势有所提高，但仅提高了0.03%。采用氮磷配合施用时，土壤矿化势有所降低，与单施氮肥相比降低了1.71%～2.01%；采用氮磷钾配合施用时，土壤有机硫矿化势与单施氮肥或氮磷配施相比均有所提高。M1处理的土壤有机硫矿化势明显高于其它所有施肥处理，提高了13.55%～45.27%。M1N1PK处理的有机硫矿化势低于单施有机肥的处理，但高于单施化肥的处理，尽管有机肥配施氮磷钾处理土壤矿化量最高 (图1)，但其矿化势却低于单施有机肥处理，有可能是添加了氮磷钾化肥后，作物根系生长旺盛，促进了根系分泌物增多，提高了土壤中微生物活性，从而提高了其矿化量。在30℃的条件下，土壤有机硫矿化势总体变化规律与20℃条件下相同，但30℃下的土壤有机硫矿化势整体高出1.29%～6.61%。可以看出，温度的升高有利于土壤中有机硫的矿化。
表 3 大豆年份不同温度下有机硫矿化动力学方程参数
Table 3. Kinetic equation parameters of organic sulfur mineralization under different temperatures in soybean season
处理
Treatment20℃ 30℃ S0 (mg/kg) k r S0 (mg/kg) k r CK 29.33 0.2561 0.991 30.48 0.2972 0.986 N1 32.23 0.1937 0.985 33.05 0.2276 0.893 N2 32.33 0.1912 0.973 33.26 0.2181 0.987 N1P 31.68 0.1843 0.991 32.09 0.2032 0.983 N1PK 34.17 0.1652 0.996 35.09 0.1751 0.991 M1 46.02 0.1451 0.971 49.06 0.1616 0.991 M1N1PK 40.53 0.1202 0.983 41.64 0.1463 0.996 注（Note）：S0—潜在矿化势 Mineralization potential；k— 一级动力学常数 First order kinetic constant. 由表4可以看出，玉米年份土壤矿化势在不同培养温度与处理之间的规律与大豆年份基本相同。对比表3、表4，土壤的有机硫矿化势呈增长趋势，20℃条件下，种植玉米的年份有机硫矿化势比种植大豆的年份提高了3.27%～6.19%，30℃条件下提高了0.23%～8.01%。
表 4 玉米年份不同温度下有机硫矿化动力学方程参数
Table 4. Kinetic equation parameters of organic sulfur mineralization under different temperatures in maize season
处理
Treatment20℃ 30℃ S0 (mg/kg) k r S0 (mg/kg) k r CK 30.29 0.2671 0.893 30.55 0.2986 0.985 N1 34.20 0.1743 0.991 35.63 0.2082 0.985 N2 34.29 0.1729 0.986 35.84 0.1991 0.992 N1P 33.64 0.1654 0.985 34.66 0.1843 0.991 N1PK 36.14 0.1367 0.976 37.67 0.1564 0.983 M1 48.64 0.1265 0.991 50.99 0.1572 0.966 M1N1PK 42.50 0.1014 0.993 44.22 0.1077 0.983 注（Note）：S0—潜在矿化势 Mineralization potential；k—一级动力学常数 First order kinetic constant. -
由图2可知，在种植大豆的年份，与CK相比，除M1处理外，其余各施肥处理均显著提高了土壤中性蛋白酶的活性。单施化肥各处理 (N1、N2、N1P) 之间差异不显著，但N1PK处理的土壤中性蛋白酶活性显著高于其它单施化肥处理。M1N1PK处理的土壤中性蛋白酶活性显著高于单施化肥处理96%～220%；但单施有机肥处理中性蛋白酶活性却显著低于其它施肥处理34.78%～79.59%。在玉米种植季，中性蛋白酶活性大体趋势与种植大豆的年份相似，但单施化肥的各个处理 (N1、N2、N1P、N1PK) 之间差异不显著，且中性蛋白酶活性整体高于种植大豆的年份2.16%～60.69%。
图 2 棕壤有机硫矿化关键酶活性变化
Figure 2. Changes of key enzyme activities of organic S mineralization in brown soil
在种植大豆的年份，除N2处理外，其它施肥处理均显著提高了土壤芳基硫酸酯酶活性。随着化学氮肥施用量的增加，土壤芳基硫酸酯酶活性没有显著变化。在单施化肥的处理中，N1和N2之间差异不显著，N1P和N1PK处理的土壤芳基硫酸酯酶活性显著高于N1和N2两个处理，其中N1PK处理的土壤芳基硫酸酯酶活性最高。M1处理土壤芳基硫酸酯酶活性显著高于除N1PK处理外单施化肥的各个处理，M1N1PK处理的土壤芳基硫酸酯酶活性最高，远高于其它任何一个处理，提高了264%～986%。在种植玉米的年份，与CK相比，各施肥处理均显著提高了土壤芳基硫酸酯酶活性；其变化趋势与种植大豆的年份相同。
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由表5可以看出，种植大豆的年份有机硫累积矿化总量尽管受温度影响较大，随着温度增高有机硫矿化量增加，但与土壤pH、有机碳以及全氮含量相关性均不显著。种植玉米的年份有机硫累积总矿化量与土壤有机碳含量和全氮含量呈显著正相关，其矿化总量受土壤有机碳和全氮含量影响较大；与土壤pH没有显著相关性。利用7个处理不同年份的作物籽粒产量与不同温度下有机硫矿化总量进行线性拟合发现，r值在0.39～0.70，尽管随着有机硫矿化总量的增加，作物产量有增加趋势，但均未达到显著差异水平。
表 5 大豆和玉米季土壤pH、有机碳、全氮含量与有机硫累积矿化总量的关系
Table 5. Relationship between soil pH, organic carbon, total nitrogen and cumulative total mineralization of organic sulfurin soybean and maize seasons
培养温度 (℃)
Culture temperature项目
Item大豆季 Soybean season 玉米季 Maize season 回归方程 Regression equation (n = 6) r 回归方程 Regression equation (n = 6) r 20 pH y = –0.0208x + 6.1258 0.3354 y = 0.0334x + 4.586 0.1841 有机碳 Organic C y = 0.1641x + 4.6497 0.6369 y = 0.3144x –0.0103 0.7693* 全氮 Total N y = 0.0115x + 1.3421 0.4320 y = 0.0271x + 0.106 0.7554* 30 pH y = –0.0209x + 6.1712 0.3384 y = 0.0333x + 4.5866 0.1838 有机碳 Organic C y = 0.163x + 4.3566 0.6339 y = 0.3137x + 0.0065 0.7671* 全氮 Total N y = 0.0114x + 1.3243 0.4264 y = 0.027x + 0.1083 0.7525* 注（Note）：*—P < 0.05. -
土壤有机硫矿化是土壤有效硫的重要来源，在土壤中有机硫的矿化与有效硫的固定是同时进行的两个过程。在这个动态平衡中土壤微生物发挥着重要作用，影响微生物活性的因素，如温度、水分、可利用碳源等都影响着平衡点的变化[32]。本研究结果表明，随着培养时间的延长，有机硫累积矿化量与时间呈直线关系，温度升高使有机硫累积矿化量增加，这与Pirela等[29]的研究结果基本一致。不同的是本研究中的土壤有机硫矿化较快，在第4周时就达到了矿化总量的50%左右，而Pirela等[29]的研究中，20℃和30℃下14周的矿化量分别占有机硫总量的1.2%～9.8%和2.4%～17.5%，这可能由于土壤类型、作物种类、试验年限不同导致的。Pirela等[29]培养研究表明，20℃和30℃下开放培养土壤有机硫累积矿化量与时间也呈直线关系。一般认为温度在10℃时，矿化作用明显受阻碍，在20℃～40℃，矿化量随温度升高而增加，40℃以上又降低。本研究中未设定10℃和40℃，因为根据当地作物生长气候条件，一般5月初种植，9月末收获，温度一般极少会出现低于10℃或高于40℃。
不同施肥措施对棕壤有机硫的矿化特征有明显的影响。对照处理由于长期 (36年) 不施肥，作物吸收的硫主要是土壤中原有的硫素，使土壤硫的储量下降，土壤有机硫矿化能力下降。单独施加有机肥和有机肥配施氮磷钾肥的处理土壤有机硫矿化量高于其它处理，主要原因是有机肥本身携带一部分有机硫，致使土壤有机硫库增大；其次有机肥在矿化分解和腐殖化过程中均需要微生物的参与，土壤微生物活力增高，有机硫矿化加快[30]。本研究中，有机硫矿化势最高的是单独施加有机肥的M1处理，其次才是M1N1PK处理，这与迟凤琴等[30]研究结果一致，黑土的有机硫矿化势在20℃和30℃时以施用有机肥的M处理为最大，其次为MNPK处理，再次为NPK处理，而以未施肥处理CK为最小。可见，棕壤有机硫矿化规律与黑土较为类似，施用有机肥使土壤中有机硫含量增高，其矿化势也会变大，即供硫潜力越大。
蛋白酶是影响土壤中氮元素的主要酶之一，其生物活性会影响土壤中氮的转化过程，而土壤中的碳、氮含量对土壤硫均有很大的影响，并且蛋白酶的活性与其它硫转化相关酶的活性之间存在一定程度的相互关系，也会对有机硫的矿化过程产生影响[33]。在本试验条件下，两种酶的变化规律各有不同，从整体来看，长期施肥处理均可提高中性蛋白酶和芳基硫酸酯酶的活性，说明施肥对提高两种酶的活性有促进作用，效果最好的为有机肥配合化肥处理。
大部分研究表明，土壤硫的矿化与土壤pH相关性不显著[10, 13, 29, 34]，也有研究发现不同土壤硫矿化与pH既呈正相关，也呈负相关关系[35]。Ghani等[31]发现在10周的培养期间14%～54%的新形成的有机硫被矿化。有机物质的C/S值也会影响硫的释放或固定，C/S值为200时矿质化占优势，土壤净获得SO42–；C/S值大于400时，以固定作用为主，发生SO42–的净丢失；C/S值在200～400，SO42–既不丢失也不获得。所以土壤有机碳可通过影响土壤中的C/S值来促进土壤有机硫的矿化。有机碳可以促进土壤团聚体的形成[36-39]。有研究发现，全氮对土壤团聚体的形成有很大影响[40]，并且土壤中95%的全氮以有机态存在，这有利于有机–无机胶结作用，土壤团聚体有利于养分的保存，可以改善土壤不良物理性状。因此有利于土壤微生物的活动，提高土壤微生物的活性，使有机硫矿化加快。本研究结果表明，在30℃时长期施肥棕壤有机硫矿化量主要受土壤有机碳含量和土壤全氮含量影响，而与土壤pH无关。这也有可能是受土壤C/S值或土壤全氮含量影响团聚体而导致的直接或间接效果。通过了解长期施肥土壤有机硫矿化的主要驱动力，提高硫素生物效应，发挥C、N、S协同效应，有效提高棕壤土壤肥力，保障农业可持续发展。
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土壤中有机碳和全氮是棕壤有机硫矿化的主要驱动力。只施用无机肥对土壤有机硫的矿化没有明显影响，而有机无机肥配合施用可显著提高土壤芳基硫酸酯酶、中性蛋白酶活性，进而提高有机硫矿化势和矿化量。玉米因其较高的生物量也成为有机硫矿化的主要驱动力。
长期施肥棕壤有机硫矿化特征及其驱动力
Driving factors of organic sulfur mineralization in brown soil under long-term fertilization
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摘要:
【目的】 探究长期不同施肥对土壤有机硫矿化量、动力学特征和酶活性的影响，揭示玉米–大豆轮作体系中棕壤有机硫矿化特征及其主要驱动因子。 【方法】 沈阳农业大学长期定位试验于1979年建立，为玉米–玉米–大豆 (一年一熟) 轮作模式。试验设置15个处理，本研究选取了其中7个处理，分别为：CK (不施肥)、N1 (低量化学氮肥)、N2 (高量化学氮肥)、N1P (低量化学氮肥+磷肥)、N1PK (低量化学氮肥+磷钾肥)、M1 (低量有机肥) 和M1N1PK (低量有机肥配施化学氮磷钾肥)。不同作物有机肥投入量相同，氮磷钾化肥投入量不同。选取2014和2015年的耕层 (0—20 cm) 土壤样品，测定土壤基本理化指标 (pH、有机碳和全氮含量)、有机硫矿化量、土壤中性蛋白酶及土壤芳基硫酸酯酶活性。同时，进行矿化培养试验，分析不同温度下有机硫矿化特征。于玉米、大豆收获后测定产量。 【结果】 长期施肥处理均提高了土壤有机硫的矿化量，7个处理总体表现为M1N1PK > M1 > N1PK、N1、N2 > N1P > CK。单施化肥条件下，增加氮肥用量对有机硫矿化作用无显著影响；单施有机肥或有机肥与化肥配施均可明显促进土壤有机硫矿化。与CK相比，M1N1PK处理有机硫矿化量提升幅度最大，提高了57.30%。利用一级动力学方程进行拟合，长期施肥均提高了有机硫矿化势，无机肥处理 (N1、N2、N1P和N1PK) 的提升幅度均较低，提升效果最优的是M1处理，比CK提高了45.27%。环境温度和作物种类均显著影响有机硫矿化量和矿化势，随着环境温度的升高，有机硫的矿化量和矿化势均明显增加；玉米种植季有机硫矿化量和矿化势均高于大豆种植季。土壤中性蛋白酶活性和芳基硫酸酯酶活性均以M1N1PK处理最高，与单施化肥相比分别提高了96%～220%、264%～986%。有机硫累积总矿化量在种植玉米的年份与土壤有机碳 (r = 0.7693) 含量和全氮 (r = 0.7554) 含量呈显著正相关 (P < 0.05)。 【结论】 土壤的有机碳和全氮含量是棕壤有机硫矿化的主要驱动力。只施用无机肥对土壤有机硫的矿化没有显著影响，而有机无机肥配合施用可显著提高土壤芳基硫酸酯酶、中性蛋白酶活性，进而提高有机硫矿化势和矿化量。玉米因其较高的生物量也成为有机硫矿化的主要驱动力。 Abstract:【Objectives】 We assessed the effects of long-term fertilization on soil organic sulfur mineralization, enzyme activities and the main driving factors of organic sulfur mineralization in maize-soybean rotation system in a brown soil. 【Methods】 The experiment with 15 treatments in brown soil was established by Shenyang Agricultural University in 1979, the cropping system was maize-maize-soybean rotation. The seven treatments used in this study were CK (no fertilization), N1 (low-level chemical N fertilizer), N2 (high-level chemical N fertilizer), N1P (low-chemical N+P fertilizer), N1PK (low-chemical N+PK fertilizer), M1 (low-level pig manure) and M1N1PK (low-level pig manure+low-chemical N+PK fertilizer). Soil samples (0–20 cm) were collected in 2014 and 2015 to determine soil basic physical and chemical property (pH, soil organic carbon and total nitrogen), organic S mineralization rate, soil neutral protease and soil aryl sulfatase activities. A chamber culture experiment was also conducted to assess the mineralization characteristics of organic S at different temperatures. 【Results】 Long-term fertilization increased the mineralization of soil organic sulfur and the overall change trend was M1N1PK > M1 > N1PK, N1, N2 > N1P > CK. The mineralization of organic sulfur did not change with the increase of chemical nitrogen fertilizer application rate. Compared with no fertilization, application of pig manure or combined application of pig manure and chemical fertilizer significantly increased soil organic sulfur mineralization. According to the first-order kinetic equation fitting, the long-term fertilization increased the organic sulfur mineralization potential. Environmental temperature and crop species significantly affected the mineralization amount and mineralization potential of organic sulfur. The mineralization amount and potential of organic S increased significantly with the increase of environmental temperature. The mineralization amount and mineralization potential of organic sulfur in maize planting year were higher than those in soybean planting year. Compared with the application of chemical fertilizer alone, M1N1PK treatment increased the activities of neutral protease and aryl sulfatase by 96%–220% and 264%–986%, respectively. Total mineralization of organic sulfur was positively correlated with soil organic carbon (r = 0.7693) and total nitrogen (r = 0.7554) in maize planting year. 【Conclusions】 Organic sulfur mineralization in brown soil was affected by fertilizer, temperature and crop species. The activities of soil aryl sulfatase and neutral protease as well as the mineralization potential and mineralization amount of organic sulfur were improved by combining application of organic and inorganic fertilizers. The organic carbon and total nitrogen in the soil were the main driving forces of organic sulfur mineralization in the maize season. Maize planting could promote the mineralization of organic S as the relatively large biomass. -
图 1 矿化培养试验不同温度和作物下各处理土壤有机硫矿化量的变化
Figure 1. Mineralization amount of soil organic sulfur in each treatment under different temperatures and crops in the laboratory culture test
图 2 棕壤有机硫矿化关键酶活性变化
Figure 2. Changes of key enzyme activities of organic S mineralization in brown soil
表 1 玉米和大豆季有机肥和化肥投入量 (kg/hm2)
Table 1. Manure and chemical fertilizer inputs in maize and soybean season
种植季
Planting season有机肥
Manure化肥 Chemical fertilizer N (N1) N (N2) P2O5 K2O 大豆季 Soybean season 13.5 × 103 30 60 90 90 玉米季 Maize season 13.5 × 103 120 180 60 60 
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表 2 长期施肥条件下大豆季和玉米季土壤化学指标
Table 2. Soil chemical properties in soybean and maize seasons under long-term fertilization
种植季
Planting season处理
TreatmentpH
(soil∶water
=1∶2.5)有机碳
Organic C
(g/kg)全氮
Total N
(g/kg)大豆季
Soybean seasonCK 5.92 a 8.28 d 1.64 b N1 5.43 bc 8.64 cd 1.56 b N2 5.31 c 8.42 d 1.61 b N1P 5.42 bc 8.95 c 1.61 b N1PK 5.33 c 8.84 c 1.59 b M1 5.71 ab 10.77 a 1.78 a M1N1PK 5.74 a 10.37 b 1.83 a 玉米季
Maize
seasonCK 5.75 c 7.98 c 0.79 cd N1 5.17 d 9.11 b 0.85 bc N2 4.74 e 9.02 b 0.95 b N1P 5.24 d 7.01 d 0.71 d N1PK 5.23 d 9.45 b 0.90 bc M1 6.81 a 11.35 a 1.08 a M1N1PK 6.07 b 11.12 a 1.07 a 注（Note）：同列数据后不同字母表示处理间在 0.05 水平差异显著 Values followed by different small letters indicate significant difference among treatments of the same crop at the 0.05 level.
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表 3 大豆年份不同温度下有机硫矿化动力学方程参数
Table 3. Kinetic equation parameters of organic sulfur mineralization under different temperatures in soybean season
处理
Treatment20℃ 30℃ S0 (mg/kg) k r S0 (mg/kg) k r CK 29.33 0.2561 0.991 30.48 0.2972 0.986 N1 32.23 0.1937 0.985 33.05 0.2276 0.893 N2 32.33 0.1912 0.973 33.26 0.2181 0.987 N1P 31.68 0.1843 0.991 32.09 0.2032 0.983 N1PK 34.17 0.1652 0.996 35.09 0.1751 0.991 M1 46.02 0.1451 0.971 49.06 0.1616 0.991 M1N1PK 40.53 0.1202 0.983 41.64 0.1463 0.996 注（Note）：S0—潜在矿化势 Mineralization potential；k— 一级动力学常数 First order kinetic constant.
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表 4 玉米年份不同温度下有机硫矿化动力学方程参数
Table 4. Kinetic equation parameters of organic sulfur mineralization under different temperatures in maize season
处理
Treatment20℃ 30℃ S0 (mg/kg) k r S0 (mg/kg) k r CK 30.29 0.2671 0.893 30.55 0.2986 0.985 N1 34.20 0.1743 0.991 35.63 0.2082 0.985 N2 34.29 0.1729 0.986 35.84 0.1991 0.992 N1P 33.64 0.1654 0.985 34.66 0.1843 0.991 N1PK 36.14 0.1367 0.976 37.67 0.1564 0.983 M1 48.64 0.1265 0.991 50.99 0.1572 0.966 M1N1PK 42.50 0.1014 0.993 44.22 0.1077 0.983 注（Note）：S0—潜在矿化势 Mineralization potential；k—一级动力学常数 First order kinetic constant.
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表 5 大豆和玉米季土壤pH、有机碳、全氮含量与有机硫累积矿化总量的关系
Table 5. Relationship between soil pH, organic carbon, total nitrogen and cumulative total mineralization of organic sulfurin soybean and maize seasons
培养温度 (℃)
Culture temperature项目
Item大豆季 Soybean season 玉米季 Maize season 回归方程 Regression equation (n = 6) r 回归方程 Regression equation (n = 6) r 20 pH y = –0.0208x + 6.1258 0.3354 y = 0.0334x + 4.586 0.1841 有机碳 Organic C y = 0.1641x + 4.6497 0.6369 y = 0.3144x –0.0103 0.7693* 全氮 Total N y = 0.0115x + 1.3421 0.4320 y = 0.0271x + 0.106 0.7554* 30 pH y = –0.0209x + 6.1712 0.3384 y = 0.0333x + 4.5866 0.1838 有机碳 Organic C y = 0.163x + 4.3566 0.6339 y = 0.3137x + 0.0065 0.7671* 全氮 Total N y = 0.0114x + 1.3243 0.4264 y = 0.027x + 0.1083 0.7525* 注（Note）：*—P < 0.05.
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